对于油脂含量较低的样品,可直接经0.45μm的分析法测水系过滤膜过滤测定,但杏仁中油脂含量高达50.33%,定杏易造成滤膜堵塞,仁中不宜过滤。氰化在了解杏仁中脂肪及蛋白质的连续流动含量及特性后,选择易过滤样品,分析法测经正己烷处理后测定,定杏结果数据见表1。仁中由表1可知,氰化样品加标回收率为98.0%~104.7%,连续流动符合测定要求,分析法测正己烷对于测定结果并未产生偏差影响,定杏因此选用正己烷为萃取剂。仁中
分别采用5、氰化10、20mL正己烷完成萃取过程,所得试验结果见表2。由表2可知,样品加标回收率为98.3%~97.3%,符合测定要求。经t检验,在此样本量下,分别加入5、10、20mL正己烷后,结果差异均无统计学意义(P>0.05),但在实际操作中,为保证油脂量高样品的萃取效率,推荐加入10mL正己烷进行萃取。
参照食品风险监测中气相色谱法的前处理条件,为了使样品能够水解地更加充分,将样品于25~40℃条件下放置48h密封水解,样品充分水解后,放至冰箱冷藏2h再离心,可使样品更好地脂水分离,且提高了正己烷的萃取效果,因此样品水解温度为25~40℃,放置时间为48h。
在1.5仪器工作条件下测定氰化物系列标准工作溶液,以氰化物质量浓度(x)为横坐标,吸光度(y)为纵坐标绘制标准工作曲线,若取0~2.00mg/L浓度区间,线性方程为y=0.00064x+0.00236,相关系数(r)为0.9994;若取0~1.00mg/L浓度区间,线性方程为y=0.00066x–0.00055,相关系数(r)为0.9999。比较发现,浓度过高易造成峰与峰之间的距离过小,峰面积叠加掩盖,导致曲线r值降低,因此连续流动分析法测定氰化物标准工作曲线的线性范围为0~1.0mg/L,超出范围的样品需稀释后进行测定。
采用连续流动分析法测定空白样品11次,若杏仁取样为1.000g,定容100mL时,用2.764倍标准差计算检出限,检出限为0.05mg/kg,定量限为0.15mg/kg。
在已知含量的样品溶液中加入1.4中低、中、高浓度的加标样品溶液,在1.5仪器工作条件下重复测定6次,试验结果见表3。由表3可知,平均回收率为98.0%~104.7%,测定结果的相对标准偏差为0.56%~1.34%,表明该方法具有较高的准确度和精密度,满足检测要求。
连续流动分析方法与气相色谱法从以下几个方面进行比对:
(1)开机稳定时间、样品用量及稳定性。连续流动分析仪开机到稳定耗时较短,从进样蒸馏到测定仅需约0.5h,全程密闭蒸馏加试剂,连续进样后,每个样品分析时间约为2min,每次进样为2mL,在分析过程中序列可以连续加入后续样品。气相色谱仪稳定耗时较连续流动分析仪长,每个样品分析时间约为10min,每次进样为10mL,且在现阶段技术条件下,样品序列编辑运行后不能随时加入后续样品,需重新编辑序列及测定标准。样品量少时,二者耗时区别不大,随着样品量增加,连续流动法测定耗时明显较气相色谱法短。连续流动法在样品提取后加入了氢氧化钠以保留氰基,使样品中被测物质在水中稳定性增加,因此从耗时耗量及样品稳定性上看,连续流动法优于气相色谱法。
(2)线性范围。连续流动法测定过程中氰化物浓度过高易造成峰过大,峰间距过小,峰面积叠加掩盖,从而导致测定值准确度低,因此连续流动分析法测定氰化物的质量浓度应在0~1.0mg/L范围内,超出线性范围的样品需稀释后测定。气相色谱法的线性范围超过1.0mg/L后,相关系数降低,在0~1.0mg/L质量浓度范围内,连续流动法的r值为0.9999,优于气相色谱法r值(0.9986),因此在此浓度范围内连续流动法优于气相色谱法。
(3)检出限。气相色谱ECD检测器对氰基响应灵敏度高,检出限较连续流动法低。虽气相色谱法检出限优于连续流动法,但两法检出限均能满足检测要求。
(4)回收率。两种方法的回收率均能满足检测要求,但气相色谱法回收率跨度远大于连续流动分析法,且方法的不可控因素更多(如氯胺T),因此,在0~1.0mg/L质量浓度范围内连续流动法回收率要优于气相色谱法。
(5)精密度。在0~1.0mg/L浓度范围内,对两种方法的检测结果进行用F检验,低、中、高浓度组的F值均大于F值表中F(5,5)=5.05,即连续流动分析法的精密度优于气相色谱法。
连续流动分析法与气相色谱法比对结果如表4所示。
建立了连续流动分析法测定杏仁中的氰化物。样品超声过程应密封且时间不能连续过长,以防止样品过热造成喷溅;样品水解后离心冷藏(4~8℃)时间应在30min以上,利于油脂分离;样品经正己烷萃取,并在滤液中加入氢氧化钠,以增加氰化物在水溶液中的稳定性;试剂在测定过程中均在较密闭空间内。连续流动分析的精密度、加标回收率等较气相色谱法的误差小,虽检出限较气相色谱法略高,但在实际工作中能满足检测要求,因此连续流动仪测定杏仁中氰化物的方法整体优于气相色谱法,其在线分析时间更短,稳定性及安全性更好,适于推广应用。
相关链接:正己烷,氢氧化钠,氰化物
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