2.2.4 线性关系考察
分别精密吸取混合对照品溶液1、不同5、树脂数鸡10、环纹15、血藤析和20、药材25、质量30μL注入高效液相色谱仪中,不同按上述色谱条件分析。树脂数鸡以峰面积(Y)为纵坐标,环纹对照品进样量(X)为横坐标,血藤析和绘制标准曲线,药材得到的质量回归方程及相关系数分别为:Y=2×109X-23 374,r=0.999 9;Y=6×108X-18 200,r=0.999 5;Y=4×108X-13 246,r=0.999 3;表明原儿茶酸在0.021 95~0.658 5μg,儿茶素在0.047 2~1.416μg,不同表儿茶素在0.041 5~1.245μg时,树脂数鸡峰面积与进样量呈良好的环纹线性关系。
2.2.5精密度试验
精密吸取混合对照品溶液,按“2.2.1”项下色谱条件重复进样6次,结果原儿茶酸、儿茶素、表儿茶素峰面积的RSD分别为0.35%、0.45%、1.83%,表明仪器精密度良好。
2.2.6 稳定性试验
取样品粉末1.0 g,精密称定,按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液,室温放置,分别于0、2、4、6、8、13、24 h进样测定,结果原儿茶酸、儿茶素、表儿茶素峰面积的RSD分别为1.52%、1.76%、1.15%,说明样品在24 h内稳定。
2.2.7 重复性试验
取同一样品粉末6份,每份1.0 g,精密称定,按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液,进样测定,结果显示原儿茶酸、儿茶素、表儿茶素峰面积的RSD分别为0.91%、0.61%、0.65%,表明重复性良好。
2.2.8 加样回收率试验
取已知含量的样品粉末6份,每份1.0 g,精密称定,分别精密加入原儿茶酸、儿茶素、表儿茶素对照品,按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液并测定,计算加样回收率。结果见表2。
2.2.9 样品含量测定
取鸡血藤粉末1.0 g,精密称定,每批药材平行3份,按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液并进样测定,并计算含量。结果见表3和图2。
2.3 芒柄花素、染料木素含量
测定参照梁永枢等[10]方法进行测定。
2.3.1 色谱条件
Waters Xselect C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:0.1%H3PO4-乙腈(66∶34),等度洗脱;检测波长:254 nm;流速:1 m L·min-1;柱温:25℃;进样量:20μL。对照品及供试品溶液色谱图见图3。
2.3.2 对照品溶液的制备
分别精密称定染料木素和芒柄花素对照品1.90、1.19 mg,加甲醇定容至5 m L,制成对照品贮备液。分别精密吸取染料木素、芒柄花素对照品贮备液1 m L,定容至5 m L作为混合对照品溶液。
2.3.3 供试品溶液的制备
取样品粉末约1 g,精密称定,加70%乙醇30 m L加热回流提取2次,每次15 min,合并2次提取液,减压回收溶剂至干,残渣加甲醇定容于5 m L棕色量瓶中,摇匀,作为供试品溶液。
2.3.4 标准曲线的制备
分别吸取“2.3.2”项下各对照品溶液20μL注入液相色谱仪中,测定峰面积积分值。以峰面积(Y)为纵坐标,对照品的进样量(X)为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程与相关系数分别为:Y=8×109X-192 794,r=0.999 9;Y=6×109X-99 356,r=1;表明染料木素在0.076~2.28μg,芒柄花素在0.047 6~1.42μg时,峰面积与进样量呈良好的线性关系。
2.3.5 精密度实验
精密吸取对照品溶液20μL,按“2.3.1”项下色谱条件重复进样6次,结果染料木素、芒柄花素的RSD分别为1.15%、0.95%,表明仪器精密度良好。
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