溶液用量大于或小于1.50mL
2.2适宜条件的共振光散选择
2.2.1反应酸度
取甜蜜素标准操作液1.00mL､维多利亚蓝B操作液2.00mL时，按1.4节方法考察1.00mLpH3.0~9.8范围的射法食品素Tris-HCl溶液对甜蜜素-维多利亚蓝B体系ΔIRLS的影响，结果见图2｡从ΔIRLS-pH曲线可知，测定甜蜜素与维多利亚蓝B反应所需加入的焙烤Tris-HCl溶液的pH为9.27，当加入的及饮加剂溶液的pH>9.27或<9.27时，体系的料中ΔIRLS均有不同程度降低，pH9.27时，甜蜜体系的共振光散ΔIRLS较大，灵敏度较高｡故实验选用pH9.27Tris-HCl溶液来控制该反应的射法食品素酸度｡
2.2.2Tris-HCl溶液(pH9.27)的用量
取甜蜜素标准操作液1.00mL､维多利亚蓝B操作液2.00mL，按1.4节方法考察0.50~3.00mL范围的测定pH9.27Tris-HCl溶液对甜蜜素-维多利亚蓝B体系ΔIRLS的影响，结果见图3｡从ΔIRLS-VpH9.27曲线可知，焙烤甜蜜素与维多利亚蓝B反应所需加入Tris-HCl溶液(pH9.27)的及饮加剂最适用量为1.50mL，溶液用量大于或小于1.50mL，料中体系的甜蜜ΔIRLS均有不同程度下降｡故实验选择体系灵敏度最大时的Tris-HCl(pH9.27)溶液用量为1.50mL｡
2.2.3维多利亚蓝B浓度取甜蜜素标准操作液1.00mL､pH9.27Tris-HCl溶液1.50mL，按1.4节方法考察0.50~3.00mL范围的共振光散维多利亚蓝B操作液对甜蜜素-维多利亚蓝B体系ΔIRLS的影响，结果见图4｡从ΔIRLS-c维多利亚蓝B曲线可知，维多利亚蓝B的最适浓度为2.50×10-5mol/L(即维多利亚蓝B操作液的最适用量为2.50mL)，当维多利亚蓝B浓度大于或小于该值时，体系ΔIRLS均有不同程度下降，当<2.50×10-5mol/L时，维多利亚蓝B用量不够，与甜蜜素反应不完全;当>2.50×10-5mol/L时，又因维多利亚蓝B过量使自身聚集作用增强从而影响与甜蜜素间的反应，灵敏度随之下降｡故实验选择体系灵敏度最大时的维多利亚蓝B溶液的浓度即2.50×10-5mol/L｡
2.2.4试剂加入顺序
取甜蜜素标准操作液1.00mL､pH9.27Tris-HCl溶液1.50mL､维多利亚蓝B操作液2.50mL，按1.4节方法考察这几种物质在加入顺序不同时对体系ΔIRLS的影响｡结果显示，这几种物质加入的先后顺序对甜蜜素与维多利亚蓝B反应的ΔIRLS有一定影响｡当加入顺序为维多利亚蓝B溶液､Tris-HCl溶液､甜蜜素溶液时，体系的ΔIRLS=1315(相对于其他加入顺序，该顺序的ΔIRLS最大)，灵敏度相对其他顺序最高｡故实验选择此最佳顺序加入各物质｡
2.2.5反应时间及稳定性
按上述选定的最佳条件，考察甜蜜素与维多利亚蓝B的反应在5~100min范围内对体系ΔIRLS的影响｡结果显示，反应从开始至20min时，随着反应时间的增加，体系ΔIRLS逐渐增大，表明此时间段的反应并未完全;当反应至20~70min范围，随着反应时间的增加，体系的ΔIRLS不再增大，基本处于稳定状态，表明此时间段内反应已完全，并可稳定50min;当反分析与检测2020年第46卷第5期(总第401期)273应至70min后，体系的ΔIRLS随时间的增加而逐渐下降，表明生成的新物质在此段时间已不再稳定｡故测定时间选在新物质稳定时间段内进行｡
2.3工作曲线及相关参数
按1.4节的实验方法，配制0.00､0.50､1.00､1.50､2.00mL甜蜜素标准操作液的标准系列溶液，扫描RLS光谱，作甜蜜素的标准曲线，见图5｡该方法的一元线性回归方程为ΔIRLS=14.20+7038ρ，相关系数r=0.9997，线性范围为0.004~0.4mg/L，检出限为0.0035mg/L，面包和饼干的定量限为2.69mg/100g，饮料的定量限为29.2mg/L｡
2.4离子强度的影响
室温下，考察了不同质量浓度的NaCl溶液对体系ΔIRLS的影响｡结果显示，7400倍的NaCl溶液对甜蜜素的测定无影响｡故离子强度不影响甜蜜素的测定｡
2.5共存物质的影响
室温下，考察了某些外来物质对测定0.201mg/L甜蜜素的影响｡结果显示，相对误差≤±5%时，500倍的Ca2+､Cu2+､K+､Mn2+､Mg2+､Sr2+､NO-3､I-､L-组氨酸､L-谷氨酸､L-丙氨酸､L-色氨酸､葡萄糖､麦芽糖､蔗糖､柠檬酸三钠，200倍的L-赖氨酸､L-白氨酸､L-亮氨酸､甘氨酸､L-异亮氨酸､乳糖､NH+4､Fe2+､C2O2-4､SO2-3､SO2-4､S2O2-3，50倍的柠檬酸､苹果酸､山梨酸､酒石酸､尿素､淀粉､维生素B12､安赛蜜､Sn2+､Fe3+､Ba2+､Al3+､Pb2+､CO2-3､Ac-､PO3-4等不干扰测定｡故本法有很好的选择性｡
2.6样品分析
准确移取各待测液0.20mL代替1.4节实验方法中的甜蜜素标准操作液，加入最佳条件下的维多利亚蓝B和Tris-HCl溶液，用水定容至10mL｡按实验方法测定面包､饼干及饮料中的甜蜜素含量，并与GB1886.37—2015比较｡从表1数据可知，测定结果与GB法基本一致，统计学检验结果表明新方法具有可靠性｡加标回收试验:准确称取1#和2#已粉碎､混匀的面包､饼干样品各3份，每份2~3g(精确至±0.0001g)，分别置于小烧杯中;准确移取3#和4#饮料各3份，每份10.00mL，分别置于小烧杯中｡在1#~4#的小烧杯样液中，分别往同一样液的3份烧杯中加入0.50､1.50和3.00mL甜蜜素贮备液，后续操作按1.3节样品处理方法进行，制得各待测液｡取各待测液0.20mL，按实验方法测定各待测液中甜蜜素的含量(n=5)，求回收率，以判断方法的准确度｡结果见表2｡表2中加标回收率和相对标准偏差表明新方法有较高的准确度和精密度｡
结论
维多利亚蓝B-甜蜜素体系用于食品中甜蜜素的测定，该方法具有操作简单､灵敏度高､选择性好等优点，准确度和精密度满足定量分析要求，并有较宽的线性范围｡测定结果的准确度与国标法相比无显著性差异｡本方法适用于焙烤食品中低脂低蛋白的面包､饼干及饮料中甜蜜素的快速测定｡
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