2.2适宜条件的共振光散选择
2.2.1反应酸度
取甜蜜素标准操作液1.00mL、维多利亚蓝B操作液2.00mL时,按1.4节方法考察1.00mLpH3.0~9.8范围的射法食品素Tris-HCl溶液对甜蜜素-维多利亚蓝B体系ΔIRLS的影响,结果见图2。从ΔIRLS-pH曲线可知,测定甜蜜素与维多利亚蓝B反应所需加入的焙烤Tris-HCl溶液的pH为9.27,当加入的及饮加剂溶液的pH>9.27或<9.27时,体系的料中ΔIRLS均有不同程度降低,pH9.27时,甜蜜体系的共振光散ΔIRLS较大,灵敏度较高。故实验选用pH9.27Tris-HCl溶液来控制该反应的射法食品素酸度。
2.2.2Tris-HCl溶液(pH9.27)的用量
取甜蜜素标准操作液1.00mL、维多利亚蓝B操作液2.00mL,按1.4节方法考察0.50~3.00mL范围的测定pH9.27Tris-HCl溶液对甜蜜素-维多利亚蓝B体系ΔIRLS的影响,结果见图3。从ΔIRLS-VpH9.27曲线可知,焙烤甜蜜素与维多利亚蓝B反应所需加入Tris-HCl溶液(pH9.27)的及饮加剂最适用量为1.50mL,溶液用量大于或小于1.50mL,料中体系的甜蜜ΔIRLS均有不同程度下降。故实验选择体系灵敏度最大时的Tris-HCl(pH9.27)溶液用量为1.50mL。
2.2.3维多利亚蓝B浓度取甜蜜素标准操作液1.00mL、pH9.27Tris-HCl溶液1.50mL,按1.4节方法考察0.50~3.00mL范围的共振光散维多利亚蓝B操作液对甜蜜素-维多利亚蓝B体系ΔIRLS的影响,结果见图4。从ΔIRLS-c维多利亚蓝B曲线可知,维多利亚蓝B的最适浓度为2.50×10-5mol/L(即维多利亚蓝B操作液的最适用量为2.50mL),当维多利亚蓝B浓度大于或小于该值时,体系ΔIRLS均有不同程度下降,当<2.50×10-5mol/L时,维多利亚蓝B用量不够,与甜蜜素反应不完全;当>2.50×10-5mol/L时,又因维多利亚蓝B过量使自身聚集作用增强从而影响与甜蜜素间的反应,灵敏度随之下降。故实验选择体系灵敏度最大时的维多利亚蓝B溶液的浓度即2.50×10-5mol/L。
2.2.4试剂加入顺序
取甜蜜素标准操作液1.00mL、pH9.27Tris-HCl溶液1.50mL、维多利亚蓝B操作液2.50mL,按1.4节方法考察这几种物质在加入顺序不同时对体系ΔIRLS的影响。结果显示,这几种物质加入的先后顺序对甜蜜素与维多利亚蓝B反应的ΔIRLS有一定影响。当加入顺序为维多利亚蓝B溶液、Tris-HCl溶液、甜蜜素溶液时,体系的ΔIRLS=1315(相对于其他加入顺序,该顺序的ΔIRLS最大),灵敏度相对其他顺序最高。故实验选择此最佳顺序加入各物质。
2.2.5反应时间及稳定性
按上述选定的最佳条件,考察甜蜜素与维多利亚蓝B的反应在5~100min范围内对体系ΔIRLS的影响。结果显示,反应从开始至20min时,随着反应时间的增加,体系ΔIRLS逐渐增大,表明此时间段的反应并未完全;当反应至20~70min范围,随着反应时间的增加,体系的ΔIRLS不再增大,基本处于稳定状态,表明此时间段内反应已完全,并可稳定50min;当反分析与检测2020年第46卷第5期(总第401期)273应至70min后,体系的ΔIRLS随时间的增加而逐渐下降,表明生成的新物质在此段时间已不再稳定。故测定时间选在新物质稳定时间段内进行。
2.3工作曲线及相关参数
按1.4节的实验方法,配制0.00、0.50、1.00、1.50、2.00mL甜蜜素标准操作液的标准系列溶液,扫描RLS光谱,作甜蜜素的标准曲线,见图5。该方法的一元线性回归方程为ΔIRLS=14.20+7038ρ,相关系数r=0.9997,线性范围为0.004~0.4mg/L,检出限为0.0035mg/L,面包和饼干的定量限为2.69mg/100g,饮料的定量限为29.2mg/L。
2.4离子强度的影响
室温下,考察了不同质量浓度的NaCl溶液对体系ΔIRLS的影响。结果显示,7400倍的NaCl溶液对甜蜜素的测定无影响。故离子强度不影响甜蜜素的测定。
2.5共存物质的影响
室温下,考察了某些外来物质对测定0.201mg/L甜蜜素的影响。结果显示,相对误差≤±5%时,500倍的Ca2+、Cu2+、K+、Mn2+、Mg2+、Sr2+、NO-3、I-、L-组氨酸、L-谷氨酸、L-丙氨酸、L-色氨酸、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、柠檬酸三钠,200倍的L-赖氨酸、L-白氨酸、L-亮氨酸、甘氨酸、L-异亮氨酸、乳糖、NH+4、Fe2+、C2O2-4、SO2-3、SO2-4、S2O2-3,50倍的柠檬酸、苹果酸、山梨酸、酒石酸、尿素、淀粉、维生素B12、安赛蜜、Sn2+、Fe3+、Ba2+、Al3+、Pb2+、CO2-3、Ac-、PO3-4等不干扰测定。故本法有很好的选择性。
2.6样品分析
准确移取各待测液0.20mL代替1.4节实验方法中的甜蜜素标准操作液,加入最佳条件下的维多利亚蓝B和Tris-HCl溶液,用水定容至10mL。按实验方法测定面包、饼干及饮料中的甜蜜素含量,并与GB1886.37—2015比较。从表1数据可知,测定结果与GB法基本一致,统计学检验结果表明新方法具有可靠性。加标回收试验:准确称取1#和2#已粉碎、混匀的面包、饼干样品各3份,每份2~3g(精确至±0.0001g),分别置于小烧杯中;准确移取3#和4#饮料各3份,每份10.00mL,分别置于小烧杯中。在1#~4#的小烧杯样液中,分别往同一样液的3份烧杯中加入0.50、1.50和3.00mL甜蜜素贮备液,后续操作按1.3节样品处理方法进行,制得各待测液。取各待测液0.20mL,按实验方法测定各待测液中甜蜜素的含量(n=5),求回收率,以判断方法的准确度。结果见表2。表2中加标回收率和相对标准偏差表明新方法有较高的准确度和精密度。
结论
维多利亚蓝B-甜蜜素体系用于食品中甜蜜素的测定,该方法具有操作简单、灵敏度高、选择性好等优点,准确度和精密度满足定量分析要求,并有较宽的线性范围。测定结果的准确度与国标法相比无显著性差异。本方法适用于焙烤食品中低脂低蛋白的面包、饼干及饮料中甜蜜素的快速测定。
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